Caractérisation de lipases isolées à partir de souches microbiennes locales.

Abstract

Les lipides constituent une grande partie de la biomasse de la terre et les enzymes lipolytiques jouent un rôle important dans la transformation de ces composés insolubles dans l'eau. Les lipases microbiennes ne sont pas comparables aux lipases d’origine végétale et animale en termes d'activité, rendement, facilité de purification, modifications moléculaires et stabilité. L'environnement où ces micro-organismes sont isolés confère certaines caractéristiques à ces enzymes. Staphylococcus aureus isolée à partir d’un biotope algérien sécrète dans le milieu de culture une lipase non-induite. La Lipase de S. aureus nommée (SAL) a été purifiée à homogénéité. La SAL pure est une protéine monomérique possèdant une masse moléculaire apparente d’environ 43 kDa. Le séquençage de 20 résidus d’acides amines de l’extrémité NH2-terminale a révélé un degré d’homologie élévé comparée aux autres lipases de Satphylocoques. La SAL présente des activités spécifiques d'environ 1600 U/mg ou de 555 U/mg en utilisant la tributyrine et l'émulsion d'huile d'olive comme substrats, respectivement. Contrairement à d'autres lipases Staphylococciques précédemment caractérisées, la SAL est stable à une gamme de pH de 6 à 9 après 1h d’incubation et maintient 50% de son activité après 10 minutes d’incubation à 50◦C. L'enzyme purifiée a été également caractérisée en utilisant la technique de couche monomoléculaire. L'activité de lipase peut être mesurée seulement quand la pression de surface atteint 15 mN/m. Les résultats obtenus montrent que la SAL hydrolyse préférentiellement les diacylglycérols à groupements esters adjacents à hautes pressions et les diacylglycérols à groupements esters distals à faible pression et une préférence pour la position sn-3 du 2,3-sndicaprine. Le pouvoir de pénétration (πc) de la SAL mesuré sur film monomléculaire d’Egg-PC est de 33mN/m. La séquence NH2-terminale de la SAL présente une forte homologie avec une lipase de la même souche nommée SAL 3 .Une délétion de 3 résidus (LKA) du côté NH2-terminale est observée dans la séquence de la SAL avec substitution de la glycine 208 et l’isoleucine 226 par une arginine et une leucine respectivement.